?Anti-ACA11是低豐度膜蛋白,反復(fù)凍融會(huì)對(duì)樣本和檢測(cè)結(jié)果造成明確的負(fù)面影響,核心影響按凍融次數(shù)遞增:?
?1~2次凍融?:僅10%~30%的靶標(biāo)降解,對(duì)結(jié)果影響較小,一般仍可檢出信號(hào),僅靈敏度略有下降;
?3次及以上凍融?:超過(guò)50%的ACA11發(fā)生降解,會(huì)直接導(dǎo)致信號(hào)大幅減弱,甚至出現(xiàn)假陰性;部分降解的蛋白片段還會(huì)引發(fā)非特異性結(jié)合,增加假陽(yáng)性概率;
?長(zhǎng)期反復(fù)凍融?:會(huì)導(dǎo)致蛋白整體變性聚集,樣本出現(xiàn)渾濁沉淀,內(nèi)參和靶標(biāo)都無(wú)法檢出,樣本失效。
反復(fù)凍融還會(huì)導(dǎo)致每次實(shí)驗(yàn)的靶標(biāo)含量不一致,直接造成實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差,結(jié)果波動(dòng)大,無(wú)法得到穩(wěn)定可靠的結(jié)論。
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